男性生殖道Uu感染对精液主要参数及精液DNA碎片率的影响

邢梦雪　陈亚强　吴成亮

[摘要] 目的 探討解脲脲原体（Uu）感染对精子主要参数和精子DNA碎片率（DFI）的影响。方法  选取2021年1～8月九江市妇幼保健院男科收治的男性不育患者758例，根据患者是否感染Uu将其分为男性不育无Uu感染组（A组）和男性不育伴Uu感染组（B组，104 copies/ml），另选取412名已生育的男性健康体检者（C组），用PCR仪定量检测Uu含量，用染色质扩散法检测DFI，同时以精子质量检测分析系统（CASA）对精液的相关参数进行分析处理。结果  A组的精液pH值、精子浓度、DFI与B组比较，差异均无统计学意义（均P>0.05）;A组的精子活力显著高于B组（P<0.05）。结论  男性生殖道Uu感染会对患者精液质量造成影响，主要方面为抑制精子活力，从而导致男性不育症的发生，因此临床需要给予更多的关注，并及早处理，从而早日帮助患者获得子代。

[关键词] 男性不育;感染;Uu;精液常规参数;精子DNA碎片

[中图分类号] R698.2          [文献标识码] A          [文章编号] 1673-9701（2022）17-0008-03

Effects of the Uu infection in the male reproductive tract on major semen parameters and sperm DNA fragmentation index

XING Mengxue1   CHEN Yaqiang2   WU Chengliang2

1. Department of Laboratory Medicine， Jiujiang Maternal and Child Health Hospital in Jiangxi Province， Jiujiang 332000， China; 2.Department of Assisted Reproduction， Jiujiang Maternal and Child Health Hospital in Jiangxi Province， Jiujiang 332000， China

[Abstract] Objective To investigate the effects of ureaplasma urealyticum （Uu） infection on major semen parameters and sperm DNA fragmentation index （DFI）. Methods A total of 758 male infertility patients received in the Department of Andrology of Jiujiang Maternal and Child Health Hospital in Jiangxi Province from January to August 2021 were selected as the research objects. According to whether the patients developed Uu infection， they were divided into two groups：
the male infertility group without Uu infection （group A） and the male infertility group with Uu infection （group B， 104 copies/ml）. And other 412 healthy males （group C） who underwent physical examination and had children were selected. The content of Uu was quantitatively measured by a PCR instrument， DFI was detected by chromatin dispersion assay， and semen related parameters were analyzed by the computer-assisted sperm analysis （CASA） system. Results There were no statistically significant differences in semen pH， sperm concentration and DFI between the group A and the group B （all P>0.05）. The sperm motility in the group A was significantly higher than that in the group B （P<0.05）. Conclusion Uu infection in the male reproductive tract will affect the semen quality of patients， which manifests as the inhibition of sperm motility， and thus it will lead to the occurrence of male infertility. Therefore， more attention and early treatment are needed in clinic， so as to help patients obtain offspring as soon as possible.

[Key words] Male infertility; Infection; Uu; Semen routine parameters; Sperm DNA fragmentation

目前，我国适当生育年龄的夫妇中不孕不育症高达13%～16%，其中男女两方因素各占一半左右[1]。男性不育症是指在未采取任何避孕措施前提下，有正常频率性生活的夫妻同居1年以上，而女方未怀孕的疾病。男性不育症是一种较为复杂的综合征，并不是由某一种因素造成的结果[2]。本病的具体病因主要有染色体异常、内分泌疾病、生殖道感染、输精管道梗阻、免疫系统异常、性功能障碍等等方面的原因[3]。在众多原因中，生殖道感染受到较高关注，其中Uu（ureaplasma urealyticum）与泌尿生殖炎症有密切关系[4]。Uu为支原体中的一种，因为生长需要尿素而得名，主要寄生于人体泌尿生殖系统，通过性生活和被污染的衣物传播，主要见于年轻性生活旺盛时期。国内外报告显示，不孕症夫妇的分泌物及精液中Uu DNA检测阳性率可高达50%以上，所以对不育患者及早进行Uu检测是十分有必要的，对提高我国育龄夫妇的优生优育率有重要意义[5～9]。本研究对不育症患者的Uu、精液常规、精液DNA碎片率等检测数据进行分析，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集2021年1～8月在九江市妇幼保健院男科门诊就诊的不育症男性患者758例（不含无精子症患者），年龄23～44岁，平均（32.05±4.51）岁;另取412名已生育的男性健康体检者，年龄23～44岁，平均（31.22±4.53）岁。两组研究对象的一般资料比较，差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。将男性不育症患者以是否感染Uu为依据分为两组，Uu阴性组（A组）516例，且未感染沙眼衣原体（CT）;Uu感染阳性组（B组，Uu≥104 copies/ml）242例。另将已生育的男性健康体检者正常组412名编为C组。纳入标准：①育龄夫妇规律性生活1年以上，未采用任何避孕措施;②结合婚育史、内外科病史，未使用烟草、酒精或非法毒品等;③外生殖器检查无病变，精浆及血清抗精子抗体阴性;④近期未使用抗菌药物，如阿奇霉素、强力霉素等。排除标准：①有外伤史、遗传性疾病家族史及性功能障碍病史者;②女方检查有明显不孕因素者。本试验已上报江西省九江市妇幼保健院生殖伦理委员会，经过讨论后，通过伦理委员会审查，允许进行本次试验。

1.2 方法

1.2.1 精液常規  标本液化后，应尽快检测精子活力，充分混匀精液标本，混匀后立即加样，加入10 μm深的Geoffrey专用玻片，每份标本检测两次，计数约200条精子，两次结果检测均值在95%可信区间内。当浓度在（2～100）×106/ml时，可直接用于检测;若标本的精子浓度>100×106/ml，需进行稀释。收集CASA分析仪检测出的各组患者精液的精子浓度、活力精子百分率等参数。

1.2.2 解脲脲原体（Uu）  Uu核酸检测试剂盒为艾康生物技术（杭州）有限公司产品。操作方法：①样本处理，在标本管中加入无菌生理盐水，混匀后吸取处理的标本至离心管中，12 000 rpm离心5 min，取沉淀物加入50 μl核酸提取液，混匀后离心10 s，水浴10 min，12 000 rpm低速离心10 min，上清液供PCR扩增用。阴性对照、阳性对照直接取50 μl，加入等量核酸提取液，混匀后加热10 min，高速离心10 min后备用。②试剂配制，从试剂盒取出Uu反应混合液，室温下融化并震荡混匀后，2000 rpm离心10 s计算准备反应试剂人份数。③加入待测样本，分别加入4 μl的阴性对照、阳性对照、样品处理上清液，盖紧反应管，转移至检测区。④PCR扩增及荧光检测，按程序扩增，检测荧光选择FAM荧光检测。阳性对照Uu值应<38，阴性对照Uu无数值，检测样本Uu值。

1.2.3 DFI  DFI（DNA fragmentation index）检测试剂采用染色质扩散法，具体操作方法如下：①使用样本稀释液对精液标本进行稀释处理;②加热低熔点琼脂糖后，加入30 μl精液标本，混匀;③取20 μl混匀后的琼脂糖精液标本置于预先处理过的载玻片之上，盖上盖玻片，放入4℃冰箱5～7 min;④配置稀盐酸或购买商品化的稀盐酸;小心推开盖玻片，垂直坠入配置好的稀盐酸试剂缸中室温7 min;⑤取出玻片，置入裂解液试剂缸中室温25 min后，放入蒸馏水试剂缸中5 min漂洗，然后分别置入浓度由低至高的乙醇溶液中各2 min，取出自然晾干;⑥使用瑞氏-吉姆萨染液对玻片染色;⑦用光学显微镜，于400倍或1000倍镜下观察200个精子涂片形态。结果判定：精子碎片率≥30%为异常结果。

1.3 统计学方法

采用SPSS 19.0中文版统计学软件进行数据分析，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，组间比较采用t检验，计数资料以[n（%）]表示，组间比较采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 A+B组与C组的Uu感染情况比较

A+B组的Uu感染阳性率高于C组，差异有统计学意义（P<0.05）。见表1。

2.2 A+B组与C组的精液常规参数比较

A+B组的精液pH值、精子浓度与C组比较，差异均无统计学意义（均P>0.05）;A+B组的精子活力显著低于C组，差异有统计学意义（P<0.05）。见表2。

2.3 A组与B组的精液常规参数及DFI比较

A组的精液pH值、精子浓度、DFI与B组比较，差异均无统计学意义（均P>0.05）;A组的精子活力显著高于B组，差异有统计学意义（P<0.05）。见表3。

3 讨论

Uu的基因组为环状双链DNA，分子量约为13×106，18.9 kb，是一种原核细胞微生物，可通过除菌滤器，无细胞壁，不能维持固有形态故而呈现出多形性，为非淋球菌性尿道炎的主要致病菌，主要侵犯人类的生殖与泌尿系统的黏膜上皮细胞，影响上皮代谢，从而影响生殖及泌尿系统的相关功能[10，11]。所以Uu检测可作为诊断及治疗生殖系统感染循证医学依据，且为泌尿系统感染常规检测项目之一。精子的损伤机制大概分为：诱导氧化应激（induce oxidative stress）、改变细胞周期和诱导细胞凋亡（change cell cycle and induce apoptosis）、改变雄激素水平（change androgen levels）、其他可能的分子机制（other possible molecular mechanisms）等[12]。而Uu对精子的损伤机制大概过程为：Uu通过直接接触或间接接触感染源等方式，寄生在附属性腺及睾丸等生殖系统中，从而对生精小管造成损伤，同时Uu本身又常黏附在精子的颈部和尾部，使精子游动速度减慢，可使精子间互相黏附、聚集，导致细胞膜相互融合，最终使得Uu中的遗传物质及有害物质全部进入精子细胞，从而导致精子细胞膜的损伤，继而降低精子活力和精子浓度。且融合后的细胞还会释放各类有毒因子损伤精液内环境，影响生精过程，造成精子畸形[13～15]。本研究结果显示，B组的精液pH值、精子浓度与A组比较，差异无统计学意义（均P>0.05）;而精子活力显著低于A组，必然严重影响男性的生育能力。此外，Uu感染可导致白细胞水平升高，使得精浆活性氧水平及细胞因子等水平迅速提升，同时引起睾丸病理损伤，从而导致男性生育能力下降。除精子活力、精子活率等精液常规参数外，精子DNA也是诊断男性不育症的重要指标，有研究表明精子碎片率的提升会对无论是自然正常受孕或对应用辅助生殖技术治疗后的受孕的最终结果造成不良影响，并与发生流产相关[16～20]。但本试验结果显示，男性不育症患者中Uu阳性感染者与未感染者精子DNA完整性比较，Uu阳性感染组的DFI并未显著高于未感染Uu组，差异无统计学意义（P>0.05），但并不能说明二者没有相关性。有些研究认为Uu感染与精子DNA碎片率呈正相关，本研究可能由于未排除禁欲天数和年龄等因素的影响所致。Uu感染造成男性不育的机制中除了DFI外，也有研究认为，Uu感染可引起精子DCXR蛋白表达量的减少和精子凋亡率的增高，并引起VEGF和VEGFR2的表达量减少，同时也可使精子顶体酶活性降低，进而精子與卵子透明带结合困难，造成男性生育困难。但当前Uu精子DNA损伤机制未完全明了，有待进一步研究发现，而本研究作为一个初步的相关性分析，存在一定不足，如未对解脲脲原体（T960群和parvo群）、禁欲天数、环境中的有害因素（如吸烟、酗酒、接触毒物等）进行分类统计比较。

综上所述，男性不育症患者Uu阳性感染者的精子活力相比阴性者下降，但对于其他参数影响本研究并未发现。Uu感染对我国不育症夫妻的发生依然是相对重要的危险因素，须及早就医及早治疗。Uu感染的具体机制、对男性生殖系统的具体损伤及临床治疗用药有待进一步分析研究。

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（收稿日期：2021-11-09）