猪采血技术在蓝耳病防控工作中的应用

来源:工作计划 发布时间:2022-11-18 点击:

杜银平

(扬州市畜牧兽医和水产技术指导站 江苏扬州 225000)

猪蓝耳病也即猪繁殖与呼吸综合征,是由猪繁殖与呼吸综合征病毒引起的一种急性、热性、高度接触性传染病,根据感染毒株致病力的强弱又可分为高致病猪蓝耳病和经典猪蓝耳病。经典猪蓝耳病最早于1987 年在美国发生和鉴定,此后迅速在全球范围内扩散开来,于1995 年传入我国。经典猪蓝耳病主要引起妊娠母猪的繁殖障碍和仔猪的呼吸道症状,造成母猪流产和产死胎、弱胎,仔猪和生长猪呼吸困难、耳朵发绀,生长性能变差,严重影响养殖场生产成绩。高致病性猪蓝耳病毒株于2006 年起逐渐成为我国优势流行毒株,与经典猪蓝耳病相比,高致病性猪蓝耳病具有更高的致病力,养殖场内猪群不分年龄、性别均可感染发病,发病猪只除出现经典猪蓝耳病症状以外,还伴随着体温明显升高,以致达到41℃以上的情况,高致病性猪蓝耳病可以导致更高的发病率和死亡率,给养殖场造成严重经济损失。时至今日,猪蓝耳病仍然在全球范围内缠绵难退,是危害世界多国生猪养殖业的重点疫病。

鉴于猪蓝耳病对生猪养殖产业的严重危害性,加之部分养殖场存在猪蓝耳病反复发生和流行的情况,因此及时监测和掌握养殖场内猪蓝耳病病原感染情况和抗体水平,是准确制定猪蓝耳病防控策略的首要前提。对养殖场猪群进行猪蓝耳病病原检测和抗体水平监测均需用到血液样品,采集血液样品是进行猪群蓝耳病监测工作的第一步,血样采集质量往往可以直接影响后续检测效果,因此血样采集工作对于猪蓝耳病防控至关重要。由于众多养殖场猪蓝耳病动态防控的需要,血样采集工作需求十分频繁;
并且当前养殖场的生猪养殖体量一般比较大,又决定了血液采集样本数量较大;
而生猪又存在皮下脂肪较厚、静脉血管暴露不充分、保定比较困难等有碍于血样采集的因素。因此,如何保速、保质、保量完成血样采集工作是对基层采样人员的严峻挑战和反复考验,在此很有必要对猪蓝耳病防控工作中所需采血技术的种类选择、操作要点、应用经验、注意事项等进行综合分析,以助一线采样人员及时、安全、高效完成猪血采样任务,进而增强猪蓝耳病防控工作的准确性和时效性。

多种猪采血技术可以在蓝耳病防控工作中得以应用,根据每头次采血量的多少可以将猪采血技术分为微量采血技术和多量采血技术,其中微量采血技术主要包括猪耳缘静脉采血技术、猪尾静脉采血技术和猪股静脉采血技术,多量采血技术主要包括前腔静脉采血技术、四肢静脉采血技术、腋静脉采血技术和乳静脉采血技术等。微量采血技术适用于仅做猪蓝耳病病原学检测之时,此时血液样品需求量较小,一般0.5~1mL 血量便可以满足猪蓝耳病病原学核酸提取和检测要求。多量采血技术适用于猪蓝耳病血清学检测之用,也适用于同时做病原学和血清学检测之用,一般采集3~5mL 品质优良的血液样品即可以满足检测之用。此外,不同体格大小的猪所适用的微量采血技术和多量采血技术均具有一定差异,因此在蓝耳病防控工作中需根据实际监测项目需要,在不同猪群选取最为适用的采血方式。现将每种采血技术的适用特点和操作要点论述如下。

1.1 猪耳缘静脉采血技术

猪耳缘静脉采血技术是最为常用的猪微量采血技术,在病原监测项目比较少、血液需求量较少的情况下可以选用这种采血方式。如果仅对监测猪群进行猪蓝耳病病原学检测时,每头次的血液样本需求量一般不超过1mL 全血样品,耳缘静脉采血完全可以满足采血任务要求。与其他采血技术相比,耳缘静脉采血具有对采血猪创伤较小、保定要求相对较低、操作相对简便等优点,并且一般情况下20kg 以上的猪耳缘静脉条件均可以满足耳缘静脉采血技术要求。当然,耳缘静脉采血也存在采血量较少、容易发生溶血、血清难以分离的特点,因此一般不适用于猪蓝耳病血清学监测任务。

猪耳缘静脉采血技术操作要点如下:首先做好保定工作,由1~2 名助手借助保定器具做好猪的保定工作,并握紧猪耳朵根部,使耳缘静脉充分扩张。其次做好采血部位消毒工作,采血人员可以用酒精棉球对猪耳缘静脉处皮毛进行反复擦拭,达到清洁消毒和进一步清晰暴露血管的目的。然后做好进针采血工作,待猪耳部消毒液干燥之后,术者持采血针头逆血流方向呈30°夹角平缓进针,待回血后即可抽取所需量的血液。最后做好采血部位止血消毒工作,采血结束后用干燥棉球压迫进针处并拔针,压迫止血数分钟,待无明显血液渗出之后用碘酒棉球擦拭消毒采血部位,然后解除猪只保定。

1.2 猪尾静脉采血技术

猪尾静脉采血技术是一种兽医临床适用的微量采血技术,未实施断尾手术的中大猪均可适用该采血方式,该采血技术适用于猪蓝耳病病原学检测。猪尾静脉采血位置位于猪尾腹面正中线两侧,中大猪第6~7 尾椎、也即距离尾根15~20cm 处尾静脉血管粗细变化不大,适宜进针采血,甚至在不用特意保定的情况下便可完成尾静脉少量采血;
小猪因存在不时卷尾摇尾的情况,且小猪尾静脉较细,不适宜进针,所以50kg 以下的小猪一般不宜采用尾静脉采血。

猪尾静脉采血技术要点:首先做好猪的安抚工作,猪尾部采血一般可以不用实施保定,选择猪自由采食的放松时刻从后侧面靠近猪,采血人员用一只手平举猪尾,使猪尾与背部平齐。其次是做好采血部位清洁消毒工作,采血人员用酒精棉球反复擦拭猪尾腹部距离尾根15~20cm 及其附近位置,达到清洁消毒的目的,同时找准进针位置。然后是做好进针采血工作,采血人员找准采血位置,平缓进针采血,针管回血后抽取所需用量血液。最后做好止血消毒工作,采血人员用干燥医用棉球压住进针处,拔出针头后持续压迫止血几分钟,止血结束后用碘酒棉球对采血部位进行擦拭消毒。

1.3 猪股静脉采血技术

猪股静脉位于猪腹股沟内,是兽医临床上使用不太广泛的一种微量采血法,可适用于猪蓝耳病病原学检测样品采血。猪股静脉采血需对猪进行仰卧保定,股静脉的探及需要使用摸脉法,因此对采血人员具有较高的股静脉采血操作经验要求。

股静脉采血技术操作要点如下:首先是做好猪的保定工作,由辅助人员对采血猪进行仰卧保定。其次是做好血管探及和消毒工作,采血人员采用摸脉法在猪腹股沟内探及猪股静脉,用手指按压股静脉近心端,使其更加充盈,用酒精棉球对预采血部进行反复擦拭,以达到清洁消毒和进一步暴露股静脉的作用。然后做好采血工作,找准进针部位,持采血针以15°角进针,待有回血现象则顺势抽取所需用量的血液即可。最后做好止血消毒工作,待采血完毕,用干燥医用棉球压住进针处并拔出针头,并用棉球持续压迫采血部位数分钟,直至无血液渗出为止,并用碘酒棉球擦拭采血部位以进行消毒,解除猪只保定。

1.4 猪前腔静脉采血技术

猪前腔静脉采血技术是兽医临床上使用非常频繁的多量采血技术,猪蓝耳病抗体水平监测血液样本采集可以采用前腔静脉采血方式。该采血方式具有前腔静脉比较粗且体表暴露相对清晰、采血速度较快、所采血液血清析出质量高等特点。同时,猪前腔静脉采血对猪的保定技术要求相对较高,并且不同体格大小的猪只保定方式也有所差异,一般情况下20kg 以下的小猪可以采用仰卧保定,较大仔猪和成年猪则需采用站立保定方式。

猪前腔静脉采血技术操作要点如下:首先对采血猪进行保定,由2 名及以上保定人员根据猪的大小选用仰卧保定或站立保定方式对采血猪进行稳妥保定,仰卧保定小猪时由一名保定人员握紧猪的两条后肢并尽量向后拉伸,另一名保定人员在猪的头侧下压其下颌骨而使得猪头部紧紧贴地,进而保证猪前肢处于踏空状态并与躯体呈垂直夹角,以充分暴露其位于第一对肋骨与胸骨结合凹陷处的前腔静脉;
对中大猪选用站立保定方式,用保定绳或保定器将猪的上颌骨吊起,至猪头颈部与水平面呈30°夹角,此时猪的两个前肢处于刚刚着地的状态,此时猪的前腔静脉充分向外突出。其次要做好采血部位消毒工作,采血人员者采用酒精棉球对预进针部位及附近皮毛进行反复擦拭消毒。然后是做好进针和采血工作,找准进针部位之后垂直进针,根据猪的大小适当调整进针深度,一般为3~5cm 为宜,如果扎中血管可见血液自动源源流入针筒,根据检测要求抽取所需用量血液即可。最后做好止血工作,术者用消毒后的干燥医用棉球压住进针处后再拔出针头,棉球压迫止血数分钟,待无明显血液渗出后用碘酒消毒采血部位,解除猪只保定。

1.5 猪四肢静脉采血技术

猪四肢静脉采血技术也是兽医临床上常用的猪多量采血技术,猪四肢皮肤相对较薄,因而四肢静脉体表探及相对容易,并且进行四肢静脉采血也无需进行麻醉,操作难度较小,对猪的伤害也比较小,所采集血液血清分离质量优良,可以满足猪蓝耳病病原学和血清学检测需求。

猪四肢静脉采血技术要点如下:首先是做好采血猪保定工作,猪四肢静脉采血需要对猪进行侧卧保定,并且为了最大程度减少因为猪挣扎而造成采血人员伤害,最好用宽布条对猪的四肢进行捆绑固定。其次是做好采血部位备皮消毒工作,采血人员用动物剃毛器将四肢采血部位猪毛剃除,前肢静脉采血位置一般在肘关节下方腋窝处,后肢静脉采血位置一般在膝关节下方范围内,猪毛清理过后采用酒精棉球进行反复擦拭消毒。然后进行采血工作,为了使四肢血管更加充盈,可以用止血带对采血前肢或后肢的近心端进行适度结扎,待血管充盈至拇指可触及的程度,找准血管进针采血,抽取所需用量血液。最后做好止血和消毒工作,采血人员用干燥消毒棉球压住进针处后拔出针头,解除结扎止血带,并用棉球持续压迫止血3~5min,待无明显血液渗出后用碘酒消毒采血部位,解除猪只保定。

1.6 猪腋静脉采血技术

猪腋静脉采血是兽医临床上的一种经验采血方法,腋静脉位于猪腹部第一肋骨与胸骨结合处凹窝前方,在猪侧卧保定的情况下清晰可见,适用于多量采血,所采血液适用于猪蓝耳病病原学和血清学检测。

猪腋静脉采血操作要点如下:首先做好猪的保定工作,2~3 名采血助手对采血猪进行侧卧保定,适当调整猪前肢位置,使得猪腋下皮肤处于紧绷状态,腋静脉清晰暴露。其次做好清洁消毒工作,采血人员用酒精棉球反复擦拭腋静脉处皮肤,达到清洁消毒和进一步暴露血管的目的。然后做好采血工作,采血人员用一只手压住腋静脉近心端,使腋静脉更加充盈,另一只手持针采血,抽取所需用量的血液。最后做好止血消毒工作,采血人员用干燥消毒棉球压住进针处,然后拔出针头,持续压迫止血3~5min,止血结束后用碘酒棉球对采血部位进行消毒,然后解除猪只保定。

1.7 猪腹皮下乳静脉采血技术

猪腹部皮下乳静脉采血法技术是一种适用范围较广的采血方法,目前普及程度不是很高,但该采血技术具有采集过程干净卫生、采血量大、采集血液质量优良、猪只尤其是成年猪保定更为容易、对猪创伤小等优点。猪腹部皮下静脉位于猪腹中线两侧各有一条,成年猪较粗,妊娠母猪和经产母猪乳静脉更为明显,仔猪相对较细,一般选取猪第1~4 对乳房外侧的腹皮下静脉进行采血。成年公猪和母猪采集乳静脉血液可以站立保定甚至不用保定,选用该种方法较前腔静脉采血更为安全和容易操作;
而仔猪则需要以腹部朝上的方式进行保定,保定较为费劲,需借着仔猪挣扎导致乳静脉更为怒张的情况下更方便进针。

猪腹部皮下采血技术操作要点:首先根据猪的大小选用合适的保定方法,成年猪站立保定,或在其侧卧休息时不作保定,仔猪则采取腹部朝上方式保定,使得腹部皮下静脉更为怒张。其次是做好消毒工作,采血人员在猪第1~4 对乳房外侧乳静脉处选取血管最为清晰的采血部位,并用酒精棉球反复擦拭采血部位,达到清洁消毒目的。然后是做好采血工作,采血人员轻挠猪采血部位附近的皮肤,以达到安抚和转移注意力的效果,同时找准采血进针部位,采血人员手持采血针进针采血,待回血后抽取所需用量的血液。最后做好止血消毒工作,采血人员用干燥消毒棉球压住进针处并拔出针头,持续压迫止血3~5min,止血结束后用碘酒棉球对采血部位进行消毒,解除猪只保定。

猪蓝耳病是一种严重影响猪呼吸道健康和猪群繁殖能力的传染性疾病,猪蓝耳病兼具猪群水平传播和垂直传播能力,蓝耳病的暴发往往可以对养殖场繁殖链造成严重打击,进而极大地影响场内经济效益。目前大多数养殖场实施仔猪群、母猪群、公猪群、育肥中大猪群分栏、分舍甚至分区域养殖模式,这有利于猪蓝耳病分猪群精准防控策略的制定和实施。猪蓝耳病精准防控策略的制定和实施需建立在科学监测结果之上,因此针对不同猪群制定科学的血样采集计划对于开展猪蓝耳病病原学和血清学监测工作至关重要。不同猪群因其体格大小和生理特点差异,适用于不同的微量采血技术和多量采血技术,现将猪蓝耳病防控过程中仔猪群、母猪群、公猪群、育肥中大猪群所适用的采血技术分类论述如下。

2.1 仔猪群采血技术

仔猪因免疫系统发育尚不完全,抗病能力较差,仔猪群体一旦感染猪蓝耳病,其发病率和死亡率较其他猪群要高,因此做好仔猪群猪蓝耳病防控工作十分重要。仔猪因静脉血管相对较细并且体表暴露不明显,因此所适用的采血技术范围较窄,如微量采血技术中的耳静脉采血、尾静脉采血均不太适用于仔猪采血,多量采血技术中的前腔静脉采血因对仔猪创伤较大,养殖户也比较抵触采用这种采血方式。总体而言,仔猪适用的微量采血技术为股静脉采血技术。仔猪适用的多量采血可以优先选择创伤较小的四肢静脉采血技术和腋静脉采血技术,前腔静脉采血技术和腹部乳静脉采血技术也可适用。

2.2 母猪群采血技术

母猪群是养殖场猪蓝耳病防控重点监测群体,母猪群体一旦感染猪蓝耳病可产生严重的繁殖障碍,导致母猪出现流产、产死胎、弱胎、木乃伊胎的几率大大增高,并且母猪感染猪蓝耳病后可以垂直传播病毒,导致仔猪群体感染发病,严重动摇养殖场繁殖链根基,因此母猪群猪蓝耳病防控工作成效往往可以决定全场繁殖链防控策略的成败。所以,母猪群体在猪蓝耳病防控过程中血样采集工作更为频繁,并且母猪群所采血样往往需要同时进行病原学和血清学检测,以动态评估母猪群野毒感染情况和免疫抗体水平。母猪群最常采用的微量采血方式为耳静脉采血,此外尾静脉采血和股静脉采血也可适用。母猪群多量采血方式可优先选择乳静脉采血、四肢静脉采血、腋静脉采血,在非必要情况下可以不必选用前腔静脉采血,以免对母猪造成较大应激。

2.3 公猪群采血技术

公猪群体感染猪蓝耳病之后可以影响其健康状况和生产性能,并且公猪精液也可带毒散毒,因此对于公猪的蓝耳病防控工作不可松懈。养殖场留用公猪群体数量一般较少,所以疫病监测过程中有条件的情况下一般应做到公猪群全覆盖。耳静脉采血、股静脉采血和尾静脉采血三种微量采血技术均适用于公猪群,其中耳静脉采血技术使用最为广泛。公猪群适用的多量采血技术包括四肢静脉采血、乳静脉采血、腋静脉采血和前腔静脉采血,其中前腔静脉采血技术最好不要频繁适用,以免对公猪造成较大应激。

2.4 育肥中大猪群采血技术

育肥中大猪群是养殖场内体量最大的群体,因此在蓝耳病防控工作中对该群体的整体血样采集样本量也比较大。三种常见微量静脉采血技术包括耳静脉采血、尾静脉采血和股静脉采血,在育肥中大猪群均适用,当然,实施了断尾手术的育肥猪群不再适用尾静脉采血技术。四种常见的多量静脉采血技术包括前腔静脉采血技术、腋静脉采血技术、四肢静脉采血技术和乳静脉采血技术,对于育肥中大猪群均适用,可以根据实际需要选用合适的采血方式。

鉴于目前部分养殖场存在猪蓝耳病反复发作流行的情况,猪蓝耳病防控工作需建立在场内猪蓝耳病病原学和血清学动态监测基础上,以科学制定养殖场猪蓝耳病动态防控方案。因此,采血技术在猪蓝耳病防控工作中至关重要且应用频繁。总体而言,猪蓝耳病防控过程中采血技术的应用需注意以下相关事项。

3.1 根据检测要求选择采血方式

猪蓝耳病病原学检测即可以使用抗凝全血样品制备的血浆,也可以使用血液凝集之后析出的血清。整体而言,如果仅开展猪蓝耳病病原学检测之时,针对各个猪群选择相适宜的微量采血方式进行血液样品采集即可。值得注意的是,由于仔猪群适用微量采血方式有限,因此也可以灵活选择合适的多量采血方式如四肢静脉采血技术、腋静脉采血技术等对仔猪进行微量采血。一般每头次采集0.5~1mL 全血样品即可满足猪蓝耳病病原学检测要求,采血结束后应将新鲜采集的血液样品注入含有EDTA2Na(乙二胺四乙酸二钠)或柠檬酸钠的抗凝管内,以制备血浆用于样品核酸提取和猪蓝耳病病原学检测。

猪蓝耳病血清学检测工作需要使用血液凝集之后析出的血清,如果需要开展血清学检测、或同时开展病原学和血清学检测,则针对各个猪群选用相适宜的多量采血方式进行采血,一般采集3~5mL 血液样品便可以满足检测要求。将新鲜采集的血液样品进行45°角静置,待血清完全析出后,将血清转移至新的容器内并做好标记,析出血清分别用于病原学和血清学检测即可。

3.2 做好自身防护和猪只保定工作

采血人员和辅助人员在采血过程中应严格做好自身防护工作,穿好防护服,并佩戴一次性医用口罩和乳胶手套,在采血过程中如出现防护服或手套破裂情况应及时更换。持针采血过程中应谨慎操作,避免针头扎伤情况的出现。此外,根据采血技术的不同应选用和落实最为合适的猪保定或安抚方式,在保定过程中动作应尽量轻柔,最好采用抚摸方式安抚采血猪,避免采血猪躁动,保定确实之后应使得猪不能左右摇摆或前后移动,以免在采血过程中因猪挣扎造成采血人员及辅助人员人身伤害。

3.3 做好采血器具消毒工作

采血过程中所使用器具均应提前做好严格消毒工作,保证所使用采血器具和盛血器具清洁干燥。此外,应准备足够量的医用酒精棉球、干燥棉球和碘酒等,以备采血部位清洁消毒和止血之用。

3.4 掌握好进针角度和深度

根据采血技术和采血部位的不同,应掌握好进针角度和进针深度,如果出现血管被刺穿的情况应立即停止该部位采血,甚至放弃该头次猪的采血工作,以免造成严重血肿而影响采血猪健康状态。特别是采用前腔静脉采血技术时,进针力度不能过大,进针深度不能过深,对于仔猪而言更要注意,以免扎伤采血猪的心包或心脏。

3.5 做好止血工作

采血结束后应即时做好止血工作,采用医用干燥棉球压迫进针部位数分钟,确保针眼处无血液渗出后方可撤去止血棉球,并用碘酒擦拭采血部位以做好消毒工作。

3.6 做好血样标记送检工作

每头次采血结束后应立即将血液缓缓注入提前备好的储血容器内,做好样品编号和标记工作,填写采样单,采样单上要详细注明养殖场点、猪群种类、存栏数、采血猪耳标号、日龄、猪蓝耳病等疫苗免疫情况、猪只健康状况等,采样人员和养殖场主均应在采样单上签字并备注详细联系方式。用于血清学检测的多量采血样品需45°角倾斜放置于保温冰盒内,以更好析出血清。所采样品附带采样单要及时送往检测部门,并且在运输过程中应尽量避免样品振荡。

综上所述,血样采集工作是做好动物疫病防疫监督工作的前提,对于需要开展常态化猪蓝耳病防控工作的养殖场尤为重要。当前现代化养殖企业一般实施生猪繁殖链不同猪群分猪舍、分区域精准养殖,这为猪蓝耳病分猪群分类防控提供了有利条件。猪蓝耳病是一种可以引起感染猪病毒血症的高度接触性传染性疾病,其活体猪群病原学和血清学检测均依赖于血液样本的采集。兽医临床长年以来积累了多种猪微量采血技术和多量采血技术,可供养殖场在进行仔猪群、母猪群、公猪群和育肥中大猪群猪蓝耳病防控监测和血液样本采集过程中合理选择和使用。熟练掌握并选用最为适宜的采血技术,可以助采血人员安全、卫生、高效地完成血液样本采集工作,进而有助于养殖场和相关部门制定和实施猪蓝耳病科学防控策略,保障生猪养殖事业健康发展。

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