【基于Ｓｍａｄ３的抗瘢痕增生药物高通量筛选体系的构建及效果评价】 高通量药物筛选技术
来源：初中周记 发布时间：2019-03-30 点击：
[摘要]目的：构建Smad3反应性不稳定增强型绿色荧光蛋白(d2EGFP)报告系统，作为抗瘢痕增生药物高通量筛选体系。方法：分别以EGFP、d2EGFP为报告基因，neor为筛选基因，构建以4x成纤维细胞a 2 Ⅰ型前胶原(COLlA2)基序为增强子、SV40为启动子的报告基因载体p4COLlA2-EGFP和p4COLlA2-d2EGFP，并分别稳定转染NIH3T3细胞，获得Smad3反应性报告细胞株NIH3T3―d2EGFP和NIH3T3-EGFP。分别向两种细胞株中加入TGF-β1，比较不同时相点d2EGFP和EGFP的表达。应用Smad3“圈套；寡核苷酸(TFD)转染NIH3T3-d2EGFP，加入TGF-β1，观察TFD对TGF-β1诱导d2EGFP表达的拮抗作用。结果：NIH3T3―d2EGFP是较理想的Smad3反应性报告细胞株，Smad3 TFD对TGF-β1诱导调控d2EGFP的表达具有明显的拮抗作用。结论：Smad3反应性d2EGFP报告系统可特异、灵敏、动态地反映和监测Smad3的活性变化。
[关键词]Smad3；COLlA2基序；不稳定增强型绿色荧光蛋白；圈套
[中图分类号]R917 [文献标识码]A [文章编号]1008-645 5(2006)05―0521―04
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