HPLC法测定克咳软胶囊中吗啡的含量_

　　[摘要]目的采用高效液相色谱法测定克咳软胶囊中吗啡的含量。方法采用高效液相色谱法,Zorbax SB-C8(250×4.6mm,5μm)柱,以甲醇:0.5%醋酸铵:1%三乙胺(26:73:1)为流动相。结果吗啡在0.105～3.36μg范围内呈良好的线性关系。R=0.9999,回收率为100.3%。结论该方法简单、灵敏、准确。
　　[关键词]克咳软胶囊; 罂粟壳; 吗啡; 高效液相色谱法
　　[中图分类号]R927.1[文献标识码]A [文章编号] 1005-0515(2010)-8-021-02
　　
　　Determination ofMorphine in Keke SoftCapsule by HPLC
　　HUANG Liang Xu Jin Li Lei
　　( Chengdu Shenghong Pharmacetical Co..Ltd. Chengdu610072 )
　　[Abstract]Objective To establish a HPLC method for the separation and determination of Morphine in Keke SoftCapsule.MethodsMorphine in the capsule were separated by HPLC on Zorbax SB-C8(250×4.6mm,5μm)column with a CH3OH-0.5%CH3COONH2- 1%C6H15N(26:73:1)as a mobile phase. ResultsThere was a good linear relationship in a range of 0.105～3.36μg for Morphine The recoveries were 100.3%,R=0.9999. ConclusionThe method is simple ,rapid and accurate.
　　[Keywords]Keke SoftCapsule; Pericarpium Papaveris; Morphine; HPLC
　　
　　克咳胶囊为卫生部药品标准17册所收载的品种(标准号:WS3-B-3215-98);由麻黄、罂粟壳、甘草等7味中药组成。克咳软胶囊为克咳胶囊的剂改品,为中药8类新药。具有止咳,定喘、祛痰的功效,用于咳嗽、喘急气短等。原标准中只收载了麻黄和甘草的薄层色谱鉴别,无含量测定指标,剂改为软胶囊后,在原标准中添加了相应的含量控制指标麻黄碱的含量测定。同时方中所含罂粟壳,其有效成分为吗啡类生物碱,具有成瘾性,结合新药开发的具体要求,故同时控制其软胶囊中吗啡的含量,对本品的质量控制具有很好的意义。
　　1仪器试剂与药品
　　1.1SSI液相色谱仪,分析之星色谱工作站; sartoriusBP211D电子天平(感量0.1mg ;0.01mg。载量210g;80g);JL-180DTH超声波清洗器。
　　1.2吗啡对照品为中国药品生物制品检定所提供(批号1201-9914,供含量测定用);克咳软胶囊(成都圣洪生物科技有限公司);缺罂粟壳阴性对照品(由成都圣洪生物科技有限公司提供);甲醇为色谱醇;水为重蒸馏水;其余试剂为分析纯。
　　2试验方法与结果
　　2.1色谱条件
　　色谱柱为Zorbax SB-C8(250×4.6mm,5μm)柱,流动相为甲醇:0.5%醋酸铵:1%三乙胺(26:73:1);流速为1.0ml/min;检测波长为220nm。
　　2.2试验用溶液的制备
　　2.2.1对照品溶液的制备精密称取吗啡对照品适量,置容量瓶中,加甲醇制成每1ml含40μg的溶液,即得。
　　2.2.2供试品溶液的制备取本品装量差异检查项下的内容物,取约6.0g,精密称定,加入硅藻土2.5g,精密称定,置烧杯中拌匀后取2.5g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加5%醋酸水溶液50ml,超声提取60分钟(250W,25kHz),取出放冷,摇匀,滤过,弃去初滤液,精密吸取续滤液20ml,置分液漏斗中,加入浓氨试液4ml,摇匀,用三氯甲烷振摇提取4次(40 ml、40 ml、 30 ml、30 ml),合并三氯甲烷液,蒸干,残渣加甲醇使溶解并转移至10ml量瓶中,加甲醇定容至刻度,摇匀,即得。
　　2.2.3阴性样品溶液的制备
　　取不含罂粟壳的样品,同供试品溶液制备方法项下制备。
　　2.3阴性干扰性试验在选定的色谱条件下,分别精密吸取对照品溶液、样品溶液和缺罂粟壳阴性样品溶液各10ul注入液相色谱仪,理论塔板数(N)按吗啡峰计算在5000以上。吗啡的保留时间约为11min,阴性样品在对照品位置无干扰峰,色谱图分别见A、B、C。
　　A.对照品
　　B.供试品
　　C.阴性样品
　　2.4标准曲线的绘制精密称取盐酸吗啡对照品适量,加甲醇制成不同浓度的对照品溶液,摇匀,作为对照品溶液,分别精密进样10μl,其进样量为 0.105μg、0.210μg、0.420μg、0.84μg、1.68μg、3.36μg,按色谱条件进行分析,测定峰面积,并以峰面积值(A)对进样量(C)进行回归,得标准曲线方程为:A=9.8621×105 C +1.1460×104,r=0.9999。以峰面积值(A)对进样量(C)作图,得一直线,结果表明在0.105～3.36μg范围内与峰面积呈很好的线性关系。
　　2.5精密度试验精密吸取吗啡对照品溶液(0.042mg/ml)10μl,连续进样5次,测得吗啡对照品峰面积RSD%为0.7%。
　　2.6稳定性试验 取样品(批号051001),制备供试品溶液及对照品溶液,分别于不同时间进样,结果表明样品及对照品在16小时内测定较稳定。
　　2.7重复性试验
　　取样品(批号051001),分别制备5份供试品溶液,按上述色谱条件进行测定,吗啡的平均含量为0.324mg/g,其RSD%=0.94%,方法重复性较好。
　　2.8回收率试验
　　精密称取样品(样品批号为051001,含量平均值为0.324mg/g)适量,6份,分别精密加入吗啡对照品溶液,按上述色谱条件进行测定,平均回收率为 100.3%,RSD= 0.86%,表明回收率的试验较好。
　　2.9样品的含量测定
　　取3批样品,依法制成供试品溶液10ul,随行对照溶液10进样,分别测定吸收峰面积,按外标法计算样品的含量。结果见表2。
　　表2样品测定含量
　　3讨论
　　3.1样品的提取净化
　　克咳软胶囊为克咳胶囊的剂改品,制成软胶囊后,其中加入了大量的色拉油作为基质,色拉油的加入对整个制样及色谱条件相对提高,其中色拉油对色谱条件影响较大,鉴于其内容物为稠膏状,制备样品时不易分散,故加入相应的硅藻土进行拌匀分散。试验中曾筛选不同的有机溶媒作为提取溶剂,结果表明只要采用有机溶媒后,其色拉油不易除去,且样品杂质峰较多,基线较差,所以试验中以酸水作为提取溶媒较好,试验中曾对不同的酸溶液作考察,结果表明除冰醋酸以外的其它酸,制得的样品含量较低,这可能与吗啡的不稳定性有关,故试验以5%的冰醋酸作为提取溶媒较好,利于用三氯甲烷进一步纯化样品处理。
　　3.2色谱条件的选择
　　试验中曾考察采用十八烷基柱进行测定[1],结果表明其色谱条件较差,试验中同时结合中国药典2005版的要求进行色谱条件的筛选[2],其流动相对分析罂粟药材较好,试验最终选择以甲醇:0.5%醋酸铵:1%三乙胺(26:73:1)作为流动相较好。
　　3.3测定结果分析
　　本品工艺中有一部分罂粟壳以生药粉入药,其含量限度结合中国药典2005版的要求,制订合理的含量范围。
　　参考文献
　　[1] 国家药典委员会编中国药典[S]北京:化学工业出版社2000一部:237.
　　[2] 李娜,赵兵,等.高效液相法测定克咳胶囊中吗啡的含量时珍国医国药2005,16(4):320-321.