[自体基质血管成分改善脂肪组织移植效果的实验研究] 脂肪基质血管成分是否有干细胞

　　[摘要]目的：分析自体脂肪基质血管成分（stromal vascular fraction cells，SVF）对脂肪颗粒（adipose granule，AG）移植的作用。方法：从6只健康新西兰家兔背部肩胛区获取脂肪组织，实验组将自体SVF与自体AG复合，植入家兔耳部皮下，对照为单纯脂肪移植。在术后1、3、6个月，用B超和游标卡尺测量移植脂肪体积；术后6个月取材常规组织学观察。结果：术后1、3、6个月对照组脂肪组织存活率分别为：（64.35±8.36）%、（58.22±2.88）%、（50.61±9.47）%；实验组脂肪组织存活率分别为：（77.42±5.1）%、（67.95±6.09）%、（72.75±4.37）%。两组比较均存在显著性差异（P 　　1.3 移植方法：术前称量新西兰家兔体重并记录，按照1ml/kg耳缘静脉注射3%戊巴比妥钠溶液。将家兔耳背部及背部肩胛区毛发剃除干净，固定家兔，用0.5%的碘伏消毒背部肩胛区以及耳背部，在背部肩胛区中心距离颈部5cm处，做一长度约5～8cm的切口，切开全层皮肤。切取约（15±0.5）g脂肪组织[4]。用PBS冲洗脂肪组织2次，剔除血块和结缔组织，并剪成直径约1mm3的脂肪颗粒，用生理盐水离心清洗（200g, 2min），置于4℃冰箱备用。实验组用无菌注射器吸取10ml脂肪颗粒置于50ml无菌三角烧杯中，加入0.25%的Ⅰ型胶原酶10ml，37℃恒温振荡50min[5-6]。再将消化后的脂肪悬液离心（600g,10min）。倒掉上层液体，用生理盐水重悬浮，再次离心（600g,10min）。然后吸出上层液体，剩余约0.2ml沉淀物即为基质血管成分（SVF）。用骨膜分离器将家兔耳背部皮肤和软骨之间分离直径为3cm的圆形腔隙。用注射器吸取2ml清洗后的脂肪颗粒与0.2ml生理盐水（NS），混合后采用18#注射针头注入左耳移植区，作为对照组；吸取清洗后的脂肪颗粒2ml与0.2mlSVF混合后，采用相同的方法注入家兔右耳移植区域，作为实验组[7]。
　　1.4检测指标及方法
　　1.4.1 B超体积测量及游标卡尺体积测量：于术后当日、1月、3月和6月分别用B超和游标卡尺测量移植脂肪组织的纵径、横径和厚度，采用体积计算公式：V=a×b×c×0.5(a为纵径，b为横径、c为厚度),分析移植脂肪组织的吸收变化情况[8]，脂肪组织存活率和吸收率分别采用下列公式计算：存活率（%）=术后时间点移植脂肪组织体积/移植当日脂肪组织体积，吸收率（%）=1-成活率[9]。
　　1.4.2 大体观察：术后观察移植区域的反应，有无感染、坏死等现象。取材后观察移植物的外观、体积、有无坏死等。
　　1.4.3 HE染色：在术后6个月将家兔实施安乐死，将移植的脂肪组织用4%的中性多聚甲醛固定，石蜡切片，进行常规HE染色，显微镜观察组织结构及照相。
　　1.5统计学处理：采用SPSS16.0统计软件进行统计学分析。资料采用配对t检验比较两组之间的差别，P 　　[3]Patrick CJ. Tissue engineering strategies for adipose tissue repair[J]. Anat Rec, 2001,263(4):361-366.
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　　[收稿日期]2010-11-16[修回日期]2011-02-21
　　编辑/张惠娟