HPLC法测定雪梨止咳糖浆中白花前胡甲素的含量_白花前胡

　　[摘要] 目的 建立雪梨止咳糖浆中白花前胡甲素的含量测定方法。方法 采用HPLC法测定雪梨止咳糖浆中白花前胡甲素的含量。结果 在HPLC法中白花前胡甲素在0.1015～2.03µg范围内呈良好的线性关系, r =0.9997(n=5),平均加样回收率为99.4%,RSD为0.6%(n=5)。结论 该方法操作简单、结果准确、重现性好,可用于该制剂的质量控制。
　　[关键词] 白花前胡甲素;HPLC;含量
　　[中图分类号] R284.1 [文章标识码]A[文章编号]
　　
　　雪梨止咳糖浆是《卫生部药品标准》中药成方制剂第十五册收载的品种,由紫菀、前胡等七味中药组成,临床上用于治疗气逆咳嗽、肺虚久咳等症,其中前胡具有疏散风热;降气化痰之功效,是该制剂的主要有效成分之一。原标准中缺少含量控制项目,为了有效控制药品质量,采用HPLC法测定该制剂前胡中白花前胡甲素的含量方法。详细说明如下:
　　1 仪器与试药LC-2010AHT高效液相色谱仪(日本岛津)、检测器:UV-VIS(日本岛津)、AUW120D电子天平(日本岛津)、乙腈为HPLC级,水为纯化水,其它试剂均为分析纯。色谱柱:Agilent C18 5μm250×4.6mm。
　　对照药材与对照品:白花前胡甲素对照品(批号:111711-200602)由中国药品生物制品检定所提供。样品5批由十堰麦克制药有限公司提供。7味药材为市售品。
　　2 方法与结果
　　2.1 色谱条件色谱柱:Agilent C18 5μm250×4.6mm,流动相:甲醇-水(75:25),流速:1.0ml•min-1,检测波长: 321nm,理论板数按白花前胡甲素峰计应不低于3000。
　　2.2 供试品溶液及阴性样品溶液的制备精密量取本品20ml(相当于含前胡药材0.2g),加三氯甲烷振摇提取5次,每次20ml,合并提取液蒸干,残渣加甲醇使溶解并转移置25ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,用微孔滤膜(0.45μm)滤过,取续滤液作为供试品溶液。
　　阴性样品溶液的制备:取缺前胡的自制样品,同法制备。
　　2.3 对照品溶液的制备及线性关系考察精密称取白花前胡甲素对照品0.02030g,置100ml容量瓶中,加乙腈溶解并至刻度,摇匀,精密分量取25ml,置100ml量瓶中,加乙腈稀释至刻度,摇匀制备成浓度分别为50.75µg•ml-1的对照品溶液。分别精密吸取2、5、10、20、40μl,注入液相色谱仪,测得白花前胡甲素的峰面积。以峰面积对进样量(μg)进行直线回归,得回归方程:
　　Y=-4.393×104+2.025×106X r=0.9997表明白花前胡甲素在0.1015～2.03µg范围内呈良好的线性关系。
　　2.4 样品测定干扰性试验按上述色谱条件,分别取供试品溶液、对照品溶液、阴性样品溶液各10μl,注入色谱仪,测定。供试品色谱中,白花前胡甲素峰与其他峰分离较好,阴性样品在白花前胡甲素出峰处无干扰峰出现,结果表明本法可行。见图1。
　　2.5 精密度试验精密吸取同一对照品溶液10μl,重复进样5次,测得峰面积并计算。结果峰面积积分值RSD值为0.4%,表明精密度良好。
　　2.6 重复性试验取同一批号的样品,按100ml取样5份,按2.2项制备供试液,吸取10μl,注入色谱仪,按上述色谱条件测定并计算含量,结果测定平均值为51.2μg•ml-1,RSD值为:1.1%。表明5次测定数据重复性良好。
　　2.7 稳定性试验取同一批号的供试液,每隔2小时进样测定,结果峰面积积分值RSD值为1.2%,表明供试品溶液在12小时内稳定。
　　2.8 回收率试验取已知含量的样品(含量:51.2μg•ml-1),分别精密量取10ml,共5份,分别精密加入浓度为25.2μg• ml-1的对照品液20ml(精密称取白花前胡甲素对照品0.01260g,置50ml的容量瓶中,加70%乙醇使溶解,并稀释至刻度,精密量取25ml,置250ml容量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,备用。)按2.2项下自“加三氯甲烷振摇提取”起制备得供试品溶液,按上述色谱条件用外标法测定,计算回收率,结果见表1。
　　2.9 样品测定按上述供试品溶液制备方法和色谱条件,测定5批样品含量,结果见表2。
　　3讨论
　　曾采用三氯甲烷萃取、大孔吸附树脂和硅胶柱对样品进行前处理,经比较认为以三氯甲烷萃取较为省时、完全、合理。并对三氯甲烷萃取次数进行了考察,对第6次三氯甲烷提取液和洗脱液的测定,未检出白花前胡甲素成分。
　　参考文献
　　[1] 《中国药典》2005年版一部[M]. 第一版,化学工业出版社,2005,187.