[烧伤创面内表皮生长因子与表皮生长因子受体蛋白变化的临床研究]重组生长因子凝胶擦脸

　　[摘要]目的：观察烧伤创面内表皮生长因子（EGF）与表皮生长因子受体(EGFr)的变化，探讨表皮生长因子在创面愈合中的作用，为临床治疗提供依据。方法：应用免疫组织化学方法对35例烧伤病人创面不同部位内的EGF蛋白和 EGFr蛋白的表达强度和分布情况进行了观察。结果：EGF蛋白和 EGFr蛋白在烧伤创面内有明显的一致表达，在创面上皮愈合边缘部位EGF蛋白和 EGFr蛋白表达最强；在创面中心肉芽部位EGF蛋白和 EGFr蛋白表达次之；在创面已经愈合部位EGF蛋白和 EGFr蛋白表达相对减弱；正常皮肤对照部位EGF蛋白和EGFr蛋白无明显的表达。结论：烧伤创面内不同部位EGF、EGFr蛋白的表达强度和分布情况不同，其变化与创面愈合密切相关，提示创面内源性的EGF、EGFr蛋白表达变化在促进创面愈合方面有很重要的作用。
　　[关键词]烧伤创面；表皮生长因子；表皮生长因子受体；免疫组织化学
　　[中图分类号]R644 [文献标识码]A [文章编号]1008-6455（2011）03-0414-03
　　
　　Clinic study on the endogenous changes of EGF and EGFr in the burn wound
　　GU Ting-min,SUI Zhi-fu,CHANG Dong-qing,SHI Cheng-fang,ZHAO Zhi-li
　　(The Center of Laser and Plastic Surgery,General Hospital of Beijing Military Command,Beijing 100125,China)
　　
　　Abstract:ObjectiveTo observate the change and the distribution of endogenous epidermal growth factor(EGF) and epidermal growth factor recepter(EGFr) in the burn wound and their effects on the wound healing.MethodsThe immunohistochemistry stainning method is used to detect the expression of EGF and EGFr in the different parts of burn wound in 35 patients.ResultsThere are more remarkably expression of EGF and EGFr in the margin part between the granulation part and the healed part of the burn wound and with obviously expression of EGF and EGFr in the center granulation part and with slightly expression of EGF and EGFr in the healed reepithelization part of the wound.ConclusionThe changes of endogenous EGF and EGFrin theburn wound are closely related to the wound healing and which may have an important role effects onwound healing.
　　Key words:burn wound;epidermal growth factor receptor(EGFr);epidermal growth factor（EGFr）; immunohistochemistry
　　
　　创面愈合过程涉及了机体全身和局部的许多病理变化。我们曾报道过人和大鼠供皮区创面愈合过程中内源性表皮生长因子、表皮生长因子受体有明显的表达，并表明其与组织修复有明显的关系[1-3]。为探讨其变化的普遍意义，我们对临床烧伤创面内的EGF、EGFr变化进行了观察，报道如下。
　　
　　1资料和方法
　　1.1一般资料：本组病人35例，男25例，女10例。平均年龄35.4岁。平均创面面积（21.3±4.5）%体表面积。
　　1.2标本留取和实验方法：征求病人同意后，创面植皮手术时分别切取烧伤创面不同部位标本包括：创面肉芽中心部（简称中心部）、肉芽与愈合皮肤的交界部（简称交界部）、愈合皮肤部位（简称愈合部）和离开创面的自身正常皮肤作为对照部位；标本切取是用眼科角膜环钻切取包括创面、创基及少量皮下脂肪在内的组织标本块，大小1cm3左右, 置于4%的多聚甲醛液固定待用。用Sigma公司鼠抗人EGF、EGFr抗体，北京中山试剂公司兔抗鼠生物素化抗体，行ABC免疫复合物法免疫组织化学染色，观察判断组织中EGF、EGFr蛋白的含量和分布。阳性细胞为棕黄色、细胞浆着色为主。判断标准为光镜下放大400倍，以所见视野内无阳性细胞为阴性； 10个以下阳性细胞时表达为弱阳性（+），视野内阳性细胞在11～30个时表达为中等阳性（++），视野内阳性细胞多于30个表达为强阳性（+++）。
　　1.3统计学处理：对烧伤创面不同部位的阳性细胞数量进行统计计算均数，以分级创面内蛋白表达的差异变化。应用SPSS11.0统计软件，以单因素方差分析比较均数间差别,P 　　
　　3讨论
　　3.1 创面愈合过程是一个复杂的生物学过程，表现为机体受到外伤刺激后反应出来的一系列生物化学的变化，包括血肿形成，炎性细胞的渗出、组织增殖、肉芽形成、细胞外基质沉积和创面的再上皮化等[4]。在整个创伤愈合的过程中，它是机体与创面内部增殖与抑制增殖相互协调的结果。在促进增殖方面许多细胞因子通过促进细胞的分裂、迁移等变化有明显的促进愈合作用；在抑制增殖方面一些细胞因子通过促进细胞的凋亡等变化抑制了组织修复。EGF是机体内一个具有促进增殖变化作用的较强的细胞因子，是细胞有丝分裂的刺激原，可以加快细胞分裂、促进增殖、改变细胞的趋化性、增加细胞的迁移，应用EGF可以明显增加创面内胶原和细胞DNA含量，加速创面愈合[5]。已经报道：临床上应用表皮生长因子在促进外伤、手术、烧烫伤及各种激光损伤等引起的皮肤创伤愈合中有明显的效果[6]；在对羊膜促进创面愈合的原因分析时发现：羊膜成分中含有多种生长因子：如EGF,KGF,HGF,和bFGF等，这些成分促进了细胞黏连、迁移、增殖和分化等重要功能，阻止了上皮细胞的凋亡，正相的调节了创伤愈合过程中增殖与抑制增殖的变化[7]。EGF在其中也发挥了很大的作用，目前的研究已经证实了EGF促进创伤愈合的作用，但临床烧伤创面愈合中EGF和EGFr的变化报道较少。
　　3.2 本文拟以Ⅲ度烧伤创面中心部、肉芽与愈合皮肤的交界部位以及愈合皮肤部位为标本，以远离创面的正常皮肤为对照动态观察创面修复过程中的EGF、EGFr变化，探讨创面愈合机理，为临床治疗提供依据。
　　3.3 本研究的组织学观察证实：Ⅲ度创面修复过程是由创面边缘上皮细胞增殖、迁移，逐渐向创面中心部位爬行最后覆盖创面肉芽、形成上皮化完成修复过程的，修复完成前创面以肉芽组织形式存在。可以看出：创面肉芽组织边缘是新生上皮迁移、增殖的前沿，是创面修复最重要的部位。
　　3.4 创面修复过程中EGF、EGFr的动态变化表明：创面肉芽组织边缘部位EGF和 EGFr表达最强，创面中心肉芽部位EGF和 EGFr表达次之，创面已经愈合部位的EGF和 EGFr表达减弱；明显表达位于创面的浅层和中层；阳性细胞主要来源于新生表皮内基底细胞和真皮浅层内的成纤维细胞，血管内皮细胞以及皮肤附属器细胞内。这些结果表明：烧伤创面内EGF、EGFr的表达变化与创面愈合密切相关，促进了创面愈合的过程。创面愈合的结果表现为创面肉芽的再上皮化，创面肉芽组织边缘EGF、EGFr的高强度表达有助于创缘上皮细胞向创面迁移，覆盖创面，创缘和创面浅层和中层EGF、EGFr的高强度表达更有助于生长因子发挥作用，该部位EGF、EGFr的高强度表达与组织学上可见的表皮细胞明显增殖和向创面中心部位的迁移相一致。创面中心肉芽部位EGF和 EGFr表达相对减弱的意义可以理解为创面内自分泌或旁分泌的EGF、 EGFr通过移动聚集在创缘部位，加强再上皮化作用；创面愈合后上皮细胞分裂增殖减缓，出现机体的生理性“接触性抑制”规律。这些结果与我们既往的实验中的有关结果相一致，表明了创面内源性的EGF、EGFr的表达对促进创面愈合作用有广泛的普遍意义。
　　3.5 我们知道：EGF发挥生物学效应首先需结合细胞膜上特异的EGFr，这样就可使刺激增殖的信号传入细胞内，引起细胞的一系列信号传递，出现细胞代谢增殖的效应[5,8]。本研究结果表现的EGF、EGFr同期高表达，有利于EGF作用的发挥，反映了机体调控创面愈合作为一种生理反应，宜于机体的修复。在创面肉芽部位EGF、EGFr蛋白含量亦少，上皮增殖不明显；创面边缘EGF、EGFr蛋白表达增强，细胞增殖再上皮化明显；创面愈合上皮化完成，内在的抑制机制产生作用，EGF、EGFr蛋白表达减弱，引起细胞增殖减慢。EGF在组织修复中的作用更侧重为促进创面的上皮化，而非侧重促进肉芽组织的形成[9]。本研究表明EGF、EGFr的这种内在变化作用可能既有利于组织修复，也可避免过度增殖形成疤痕。如果EGF调控出现失常可能就会导致创面修复的障碍：调控过弱则形成创伤愈合过慢长期溃疡；调控过强导致创伤愈合后明显的疤痕增生。所以合理的应用EGF、促进创伤愈合是一个深入研究的课题，为了提高自体组织内EGF的分泌，已经证明：应用转染EGF基因的方法对促进创面的愈合有明显的效果，这对许多难愈合创面的修复提供了一个新的具有广泛前景治疗方法[10]。创面愈合过程中有许多种生长因子在进行调控，本研究仅仅观察了烧伤创面内EGF、EGFr的变化，深入研究创面内多种细胞因子的变化，更加理解创伤愈合的机理，临床治疗保持与内源性的生长因子表达的平衡可能对促进创面修复有很大的作用。
　　
　　[参考文献]
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　　[10]姚建,唐世杰.转基因治疗在创面愈合中的进展[J].广东医学,2007,2(1):154-156.
　　
　　[收稿日期]2010-09-16[修回日期]2011-02-10
　　编辑/张惠娟